青椒中還原型維生素C含量的測定整體方案
點擊: 次 時間:2018-12-03 16:16
概述
維生素C是維持人體正常生理代謝不可缺少的一類有機化合物，在人體內參與氨基酸和神經傳遞、膠原蛋白合成，具有降低毛細血管的通透性，刺激凝血功能、增加對感染的抵抗作用等。人體缺少維生素C會引起多種疾病，如壞血病。
然而人體所需的維生素C大多數由新鮮的蔬菜供給，新鮮的青椒中維生素C的含量很高。因此，測定包括青椒在內的新鮮蔬菜中維生素C的含量是營養分析的重要內容。
還原型維生素C的測定方法很多，有熒光分光光度計法、過氧化物酶法、2，6-二氯靛酚法等。由于它較易被空氣中的氧所氧化，上述方法存在著各種各樣的缺陷。
本應用方案選擇鉬藍比色分光光度法，因為磷鉬酸銨經還原劑維生素C還原后，可以生成亮藍色的絡合物，通過分光比色可以測定青椒中還原維生素C。本法快速、準確、靈敏度高。
一、實驗部分
1.1儀器與試劑
紫外可見分光光度計;
6%的鉬酸銨溶液:準確稱取鉬酸銨 30. 0000g，加適量蒸餾水溶解后定容至 500mL ;
草酸- ED TA溶液:準確稱取含結晶水的草酸 6. 5000g， ED TA 0.0600g，充分溶解定容至1000mL ;
偏磷酸-醋酸溶液:溶解20g片狀偏磷酸于40mL醋酸中，稀釋至500mL ，用濾紙過濾，取濾液備用;
標準V c溶液:準確稱取 V c 0. 0500g;用上述配好的草酸- ED TA溶液定容于100mL的容量瓶中，使標準液濃度達到 0. 5m g mL ;
6%的硫酸溶液。
1.2實驗方法
準確稱取一定量的市售青椒，加入草酸- ED TA溶液，用攪碎機搗碎后移入250mL容量瓶中，定容，過濾，濾液即為待測樣品的提取液。吸取上述青椒的提取液 1mL于 25mL的容量瓶中，加入 9. 00mL草酸- ED TA溶液1. 00mL偏磷酸-醋酸溶液和 3. 00mL的硫酸，最后再加入 3.00mL鉬酸銨，顯色后，以蒸餾水為參比測其吸光度。
二、結果與討論
2.1最大吸收波長的確定
取一定量的V c 0. 5m g mL標準溶液，采用 1. 2所述的方法進行顯色后，在波長 600nm - 1100nm范圍內用紫外可見分光光度計進行波長掃描，結果見圖 1。
由圖 1可見鉬藍的絡合物在 839nm處有最大吸收值，本實驗選擇 839nm為測定波長。
2.2鉬酸銨用量的影響
固定硫酸和V c標準溶液的用量，改變鉬酸銨的用量，測其吸度。結果見圖2。由圖2可見隨著鉬酸銨用量的增大，吸光度也隨之增大，在3. 00mL左右吸光，本法選用 3.00mL鉬酸銨。
2.3酸度的影響
其他條件固定，改變硫酸的用量，測其吸光度。以硫酸的用量為橫坐標，吸光度為縱坐標，做曲線，結果見圖3。由圖3可見硫酸的體積在4. 00mL以內，吸光度比較穩定，但大于4.00mL后隨之減小，超過5.00mL后吸光度驟然下降。所以本實驗硫酸的體積選用 3. 00mL.
2.4顯色時間的確定
吸取1. 00mL標準溶液V c于25mL容量瓶中，在上述最佳實驗條件下進行顯色后，在不同的顯色條件下測其吸光度，結果表明該體系在草酸- ED TA介質中于室溫下13m in后反應達到穩定，本實驗選擇室溫下顯色時間為 13m in。
2.5標準曲線的確定
分別吸取 0. 20、0. 40、0. 60、0. 80、1. 00、1. 20mL的標準V c (0. 5m g mL )溶液于 25mL的容量瓶中，分別加入草酸- ED TA 9. 80、9. 60、9. 40、9. 20、9. 00、8. 80mL ，再分別加入 1. 00mL偏磷酸-醋酸溶液，3. 00mL的硫酸溶液和3. 00mL的鉬酸銨溶液，顯色后測定其吸光度。繪制出以溶液濃度 (C )為橫坐標，吸光度 A為縱坐標的標準曲線。通過實驗方法測定V c濃度與吸光度之間的標準曲線方程為:A = 13.580C + 0. 002，相關系數 r = 0. 999。V c濃度在 0. 004- 0. 024m g mL范圍內服從比耳定律。
2.6樣品回收率和變異系數的測定
準確稱取市售青椒 176. 7914g，經過處理后配成溶液，用上述方法平行測定 6次。測得吸光度，在標準曲線上查出對應濃度，并從實驗結果計算出相對平均偏差，回收率和變異系數，見表 1。
經過計算市售青椒樣品中的還原型V c的含量為 0. 2390m g g，回收率為 97. 2%。變異系數為 2.51%。
三、結論
選用鉬藍分光法測定青椒中V c的含量，通過實驗確定最大吸收波長，硫酸和.磷鉬酸銨的最佳用量和最佳的顯色時間，并在最佳條件下測定樣品中V c含量，該方法簡便、快速、準確。
（內容來源渤海大學學報）
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